Jeffrey Cross
Jeffrey Cross

ราคาถูก DIY GFP (โปรตีนเรืองแสงสีเขียว) กระจ่าง

มันไม่ใช่เครื่องรางที่น่าขนลุกที่ทำให้ฉันอ่านราชกิจจานุเบกษาของ Worm Wormค่อนข้างเป็นการพูดคุยกับแคทรีนเฮดเจสนักวิทยาศาสตร์และศิลปินที่ฉลาดมีความกระตือรือร้นและมีชื่อเสียง ราชกิจจานุเบกษา เคล็ดลับในการสร้างไฟ GFP ในราคาถูก GFP หรือโปรตีนเรืองแสงสีเขียวเป็นตัวทำเครื่องหมายเรืองแสงที่ใช้บ่อยในชีววิทยาโมเลกุลและประสาทวิทยาศาสตร์

ในช่วงที่เธอเรียนปริญญาโทที่มหาวิทยาลัย Humbolt State แคทรีนก็เหมือนกับนักวิจัยทางวิทยาศาสตร์อื่น ๆ อีกหลายคนถูกท้าทายด้วยการลดงบประมาณและความยากลำบากในการหาทุนสนับสนุน เพื่อที่จะทำงานของเซลล์ประสาทไส้เดือนฝอยในแผนกเงินสดเมื่อเธอต้องการอุปกรณ์ใหม่เป็นเวลา 11 ชั่วโมงแคทรีนปลดปล่อยพลังของเธอ“ มาดูกันว่าเราจะทำสิ่งนี้ได้ดีและถูกกว่า” เพื่อแฮ็ค DIY GFP illuminator ให้เป็นระบบที่ดีขึ้นและคุ้มค่ากับการวิจัยสามารถมองเห็นเซลล์ประสาทในหนอนตัวจิ๋วเพียง 1 มิลลิเมตร

ทำไมเรื่องนี้ถึงสำคัญสำหรับแคทรีน ในคำพูดของเธอ“ หนึ่งในสายพันธุ์ของฉันยังคงเลือก GFP ต่อไปถ้าฉันไม่ได้เลือกเวิร์มที่สว่างที่สุดในแต่ละรุ่น หากไม่มีวิธีการดู GFP ในกล้องจุลทรรศน์“ ผ่า” ที่ฉันเก็บหนอนแต่ละตัวด้วยไม้พายลวดเล็ก ๆ ฉันไม่สามารถรับประกันได้ว่าลูกหลานของพวกเขาทั้งหมดจะเรืองแสงซึ่งเป็นปัญหาเมื่อฉันพยายามดูว่า การรักษาสร้างความเสียหายให้พวกเขาเพื่อให้พวกเขาสูญเสียการเรืองแสง”

ผลลัพธ์:“ กล้องจุลทรรศน์เดียวที่เรามีกับความสามารถของ GFP นั้นไม่เหมาะสมสำหรับการขยายเวิร์มในขณะที่เคลื่อนย้ายพวกมันและการซื้อขอบเขตที่เหมาะสมจะมีราคาหลายพันดอลลาร์ ฉันเหลืองบประมาณ $ 750 ดังนั้นฉันใช้เวลาประมาณ $ 80 สำหรับชิ้นส่วน LED และสร้างไฟส่องสว่าง มันไม่สว่างพอที่จะเห็นเซลล์บาง ๆ ที่ยาวได้ดังนั้นฉันจึงใช้เงิน $ 825 ในตัวกรองคุณภาพสูงกู้กล้องมองภาพด้วยกล้องจุลทรรศน์แบบเก่ามาเป็นเลนส์โฟกัสและใช้อุปกรณ์ประปาเพื่อติดตั้งลงบนไมโครเมตรที่เรามีในห้องแล็บ จากนั้นฉันก็สามารถเลือกเวิร์ม shiniest ของฉันยกตัวอ่อนหนอนที่น่าเชื่อถือและจบการทดลองของฉัน หากฉันติดตามฟีเจอร์ที่มีขนาดใหญ่ขึ้นใน GFP หรือฉันใช้โปรตีนเรดฟลูออเรสเซนต์ฉันอาจใช้ฟิลเตอร์ราคาถูกและทำได้ทั้งหมดภายใต้ $ 100 ถ้าฉันจะทำการทดลองต่อไปฉันสามารถใช้ไฟส่องนี้เมื่อข้ามสายพันธุ์ GFP เพื่อดูว่าลูกหลานคนใดที่มีเครื่องหมาย GFP ทั้งคู่ "

ที่ปรึกษาวิทยานิพนธ์ของ Kathryn สนับสนุนการทดลองประเภทนี้ในขณะที่เขาและอาจารย์ที่ปรึกษาวิทยานิพนธ์ของเขาได้พัฒนาอุปกรณ์ DIY ของตนเองเพื่อตรวจจับความเร็วการนำกระแสประสาทในน้ำจืดขนาดเล็ก ต้นแบบยังคงแขวนอยู่บนกระดานข่าวบนโต๊ะทำงานของเขา เขาไม่เพียงสอนนักเรียนสรีรวิทยาสัตว์ถึงวิธีการทำสรีรวิทยาโดยไม่รุกล้ำเขาและนักเรียนวิจัยของเขาได้ตีพิมพ์เอกสารโดยใช้วิธีนี้เพื่อรวบรวมข้อมูล เขาเป็นแฟนตัวยงของ Backyard Brains Spiker Box และหวังว่าจะได้เห็นมันในทางปฏิบัติ

ด้วยการแฮกเครื่องมือของเธอเองโดยไม่ต้องเสียค่าใช้จ่ายสูงเกินไปในการซื้อเครื่องมือส่องแสงเฉลี่ยหลายพันดอลลาร์ (แม้จะใช้แล้ว) แคทรีนก็สามารถทำวิทยานิพนธ์ให้เสร็จได้ ตัวส่องสว่างมีประโยชน์สำหรับนักวิทยาศาสตร์ DIY ที่ต้องการดูการแสดงออกของยีน GFP หรือ RFP (โปรตีนเรืองแสงสีแดง) ในแบคทีเรียหรือค elegans และแคทรีนเป็นข้อพิสูจน์ว่าคุณสามารถทำได้ในช่วงเล็กน้อย

รายละเอียดเกี่ยวกับตัวกระจ่างพื้นฐานของ GFP ราชกิจจานุเบกษาของ Worm Breeder อยู่ด้านล่าง (หลังจากกระโดด) หากต้องการเรียนรู้เพิ่มเติมเกี่ยวกับการปรับปรุงของ Kathryn และดูบันทึกย่อของเธอเกี่ยวกับเวิร์มให้ดูโพสต์ของเธอ สีที่สวยงาม.

[มอบเครดิตให้กับ Ian Chin-Sang และ Weiwei Zhong]

ใช้ LEDs เป็นแหล่งต้นทุนต่ำเพื่อตรวจจับ GFP และ DsRED

Ian Chin-Sang1 และ Weiwei Zhong ภาควิชาชีววิทยา, มหาวิทยาลัยควีน, คิงส์ตัน, ON, แคนาดา, 2 ภาควิชาชีวเคมีและเซลล์ชีววิทยา, มหาวิทยาลัยไรซ์, Houston TX จดหมายโต้ตอบถึง: Weiwei Zhong ([ป้องกันอีเมล])

ส่วนประกอบการตรวจจับการเรืองแสงมีราคาแพงเกินกว่าที่จะติดตั้งในสโคปทุกตัว บ่อยครั้งที่เครื่องหมายฟลูออเรสเซนต์ของเราสว่างมากและไม่ต้องการความจุเต็มที่ของอุปกรณ์ดังกล่าว ที่นี่เรานำเสนอการติดตั้ง LED ที่มีราคาเพียงประมาณ $ 100 และสามารถตรวจจับเครื่องหมายเรืองแสงที่สว่างจ้าเช่น myo-2 :: GFP การตั้งค่า (รูปที่ 1) ประกอบด้วย:

  • X-acto ช่วยมือหรืออะไรก็ตามที่สามารถวางตำแหน่ง LED (Amazon.com)
  • สายไฟที่มีสวิตช์ (ร้านฮาร์ดแวร์ในพื้นที่)
  • ไดรเวอร์ Xitanium LED 17 วัตต์ (LED ซัพพลาย)
  • ตัวเชื่อมต่อไดรเวอร์ Xitanium (แหล่งจ่ายไฟ LED)
  • ฮีทซิงค์ (ไฟ LED)
  • เลนส์สปอต (แหล่งจ่ายไฟ LED)
  • Luxeon V Star optic holder (แหล่งจ่ายไฟ LED)
  • Luxeon V Star LED สีน้ำเงินสำหรับการตรวจจับ GFP (แหล่งจ่ายไฟ LED) หรือ LED Luxeon V Star สีเขียวสำหรับการตรวจจับ dsRED (แหล่งจ่ายไฟ LED)
  • ตัวกรองการกระตุ้นเสริม: Roscolux # 4290 CalColor 90 Blue สำหรับ GFP หรือ # 389 Chroma Green สำหรับ dsRED (Rosco.com | Edmund Optics)
  • ตัวกรองการปล่อย: Roscolux # 12 Straw สำหรับ GFP หรือ # 19 Fire สำหรับ dsRED (ความพร้อมใช้งานเหมือนกับตัวกรองการกระตุ้น)

รายละเอียดเกี่ยวกับวิธีการรวมอุปกรณ์นี้เข้าด้วยกันจริงสามารถพบได้ที่นี่และที่นี่

รูปที่ 1 การตั้งค่า LED

รูปที่ 2 การใช้การตั้งค่า LED เพื่อตรวจจับ myo-2 :: GFP ในสัตว์ mIn1

รูปที่ 3 การใช้การตั้งค่า LED เพื่อตรวจจับ myo-2 :: dsRED

เมื่อประกอบ LED เข้ากับไดรเวอร์ตรวจสอบให้แน่ใจว่า +/- สิ้นสุดที่ LED และปลายกลาง / ปลายบนสายไฟตรงกับที่อยู่บนไดรเวอร์ ใช้กาวที่ไม่นำไฟฟ้าเช่นกาวซิลิโคน (Devcon ส่วนที่ 2045 ร้านฮาร์ดแวร์ในพื้นที่) เพื่อใส่ที่ใส่เลนส์ลงบน LED ฟิลเตอร์การกระตุ้นสามารถติดกาวเข้ากับเลนส์ได้โดยใช้กาวปริมาณเล็กน้อยที่ขอบ ตัวกรองการปล่อยมลพิษสามารถติดเทปไว้ใต้วัตถุประสงค์ของกล้องจุลทรรศน์

การตั้งค่านี้มีอายุการใช้งานยาวนานไม่ต้องใช้เวลาอุ่นเครื่องหรือเย็นลงและไม่มีรังสี อย่างไรก็ตามมันสามารถตรวจจับสัญญาณแรงเท่านั้น เราใช้การตั้งค่าเพื่อตรวจจับเครื่องหมายต่อไปนี้: myo-2 :: GFP (รูปที่ 2), sur-5 :: GFP, ajm-1 :: GFP และ myo-2 :: dsRED (รูปที่ 3)

ใช้ LEDs เป็นแหล่งต้นทุนต่ำเพื่อตรวจจับ GFP และ DsRED


Bio: Eri Gentry เป็นผู้ประกอบการด้านเทคโนโลยีชีวภาพผู้จัดงานชุมชนด้านวิทยาศาสตร์พลเมืองและเป็นผู้ร่วมก่อตั้ง BioCurious ซึ่งเป็นแฮกเกอร์สเปซคนแรกสำหรับเทคโนโลยีชีวภาพในบริเวณอ่าวซานฟรานซิสโก

หุ้น

แสดงความคิดเห็น